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生物制藥殘余DNA抽提試劑盒（NaI法DNA提取試劑盒）簡介

更新時(shí)間：2021-02-05 點(diǎn)擊次數(shù)：4075

生物制藥殘留DNA提取試劑盒（ biohub B48202 ）

生物制藥殘留DNA提取試劑盒（NaI法）

殘留DNA提取試劑盒遵照中國藥典記載的NaI法，適用于疫苗和治療用生物制品所含宿主細(xì)胞殘余DNA的提取。

殘留DNA提取試劑盒可以提取樣品中含有的極微量的DNA，回收率較高。DNA的提取操作時(shí)間為60-90 分鐘。提取的DNA可以通過qPCR進(jìn)行定量。

生物制藥殘余DNA抽提試劑盒（NaI法DNA提取試劑盒）

特點(diǎn)

●　遵照中國藥典登載的NaI法^*1
●　高回收率
●　單管操作（無需換管），耗時(shí)僅60-90 min
●　不需要Phenol和Chloroform等有機(jī)溶劑
●　兼容多種DNA

*1 為使DNA檢測方法與標(biāo)準(zhǔn)保持同步，中國藥典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立殘留細(xì)胞DNA檢測國家標(biāo)準(zhǔn)。NaI法將作為殘留DNA提取方法，被新增至2020版的中國藥典中。

◆ 原理

1.　使樣品中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)溶于NaI；
2.　Isoproanol與糖原選擇性地共沉淀DNA。

◆ 使用方法

q 1、每個(gè)樣品添加500uL或稀釋至2 mL微離心管

q 2、加20uL洗滌劑組合液到每管，并輕輕的渦旋

q 3、選項(xiàng)：如果高濃度的蛋白質(zhì)干擾DNA提取和DNA分析，每個(gè)樣品中吸取添加20uL消化蛋白酶K（10mg/ml），在60°C， 20min，然后在95°C滅酶 5min

q 4、加500uL NaI溶液到每個(gè)微管中，并輕輕的渦旋

q 5、50°C孵育10分鐘

q 6、加900uL異丙醇渦旋

q 7、室溫孵化30min

8、離心機(jī)12000轉(zhuǎn)15min

9、輕輕倒出或吸出上清液

q 10、添加1.8ml洗滌緩沖液（含酒精），渦旋

11、離心機(jī)12000轉(zhuǎn)10min

q 12、輕輕倒出或吸出上清液

q 13、風(fēng)干DNA

q 14、添加20-60uL水輕輕渦旋溶解DNA

q 15、純化的DNA可進(jìn)行PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、酶切、DNA測序、熒光染色法

注意事項(xiàng)：
1）用于稀釋NaI溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2）配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原溶液到無菌離心管中至合適體積即可。
3）在保存期間NaI溶液會結(jié)晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。
4）提取步驟應(yīng)在DNA 變性之前，因此重要的是使用無菌技術(shù)盡可能降低DNA 污染。預(yù)先包裝好的無菌吸管、無菌試管和手套都要經(jīng)過此步驟。

5) 請于各步驟使用攪拌器將溶液攪拌均勻。樣品溶液里含有DNA酶時(shí)，進(jìn)行步驟2之前請先進(jìn)行步驟3。步驟4里樣品溶解不*時(shí)，請把保溫溫度升至40-60℃幫助溶解。但是含有部分蛋白（γ-球蛋白）或高濃度蛋白的樣品（＞50mg/ml），加熱可能會導(dǎo)致蛋白聚集，請注意。

◆ 應(yīng)用案例

DNA spiking test（加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)）

DNA Extractor Kit( biohub B48202 )可以高產(chǎn)量提取殘留DNA，甚至少量殘留DNA。

◆ 試劑盒構(gòu)成

內(nèi)容物	內(nèi)容量
NaI法溶液	25ml
洗滌劑組合液	1ml
洗滌緩沖液（無酒精）	30 mL
糖原溶液	100uL

備注：每種成分不單獨(dú)出售

試劑盒不包含：

乙醇（洗滌緩沖液）

異丙醇（用于DNA沉淀）

2ml微復(fù)合管（離心或等效的）

微型離心機(jī)（離心或等效的）

◆ biohub B48202產(chǎn)品信息

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	儲存	包裝
B48202	DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method) 殘留DNA提取試劑盒（NaI法）	2-10℃	50 tests

■ 保存
2 - 10℃，試劑盒的保存期為2 - 3 年。

在工業(yè)生產(chǎn)的疫苗和治療用生物制品（干擾素、白細(xì)胞介素、單克隆抗體、重組蛋白）中，宿主細(xì)胞殘余DNA污染直接影響終產(chǎn)品和整個(gè)生產(chǎn)過程的質(zhì)量和產(chǎn)量，可能引起動物致瘤、感染病毒DNA等嚴(yán)重后果，中國藥典、WHO、EU、FDA對宿主細(xì)胞DNA殘留*都有規(guī)定。傳統(tǒng)的DNA提取方法蛋白酶K-SDS法在SDS的穩(wěn)定和促進(jìn)下降解細(xì)胞中的蛋白質(zhì)特別是核酶，再經(jīng)有機(jī)溶劑萃取得到高質(zhì)量的DNA，但毒DNA和生物制品宿主細(xì)胞殘余DNA的提取試劑盒。使用新型提取步驟，用（NaI）作為促溶劑，穩(wěn)定且靈敏度高、時(shí)間短，無有毒溶劑，無需復(fù)雜和費(fèi)力操作，即可從樣品中得到高質(zhì)量和高回收率的DNA。

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