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KlenTaq1說(shuō)明書(shū)

KlenTaq1是一種熱穩(wěn)定性 DNA 聚合酶，由基因的 5' 缺失表達(dá)，編碼 Thermus Aquaticus DNA 聚合酶，留下高活性甚至更耐熱的 DNA 聚合酶活性。在反應(yīng)緩沖液 PC2 中反復(fù)暴露于 980°C 似乎不會(huì)降低酶活性。即使暴露于 990°C 后仍保持顯著活性。全長(zhǎng)酶不能耐受這些處理。              ???

  所述   KlenTaq1 ™酶缺少野生型全長(zhǎng)Taq DNA聚合酶的N-末端部分。這部分蛋白質(zhì)與大腸桿菌 DNA 聚合酶 1 的 5' – 核酸外切酶區(qū)域同源。  因此，KlenTaq1 ™ 與 Hoffman LaRoche 的 Stoffel 片段相似但又不同。           

     對(duì)于KlenTaq1不含甘油（目錄號(hào)1001 NGKT）：儲(chǔ)存酶，并于4℃下的緩沖液中。儲(chǔ)存緩沖液為 50 mM 硫酸銨、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巰基乙醇、無(wú)明膠和 0.5% Thesit。               

對(duì)于50% 甘油中的KlenTaq1 （貨號(hào) 1001）：將酶儲(chǔ)存在 -200°C，將緩沖液儲(chǔ)存在 40°C。儲(chǔ)存緩沖液中的甘油可防止在 -20°C 下凍結(jié)，但 Thesit 在此溫度下會(huì)導(dǎo)致一些增稠。它是可選的，但建議在分配前在冰上加熱至 0°C。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，可以采用 -70°C 或 -80°C，但我們建議酶不要冷凍超過(guò)一次。重新冷凍和解凍會(huì)導(dǎo)致酶活性降低。儲(chǔ)存緩沖液為 50% 甘油 (v/v; 63% w/v)、50 mM 硫酸銨、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巰基乙醇、無(wú)明膠和 0.5% Thesit。               

  濃度：5 個(gè)  KlenTaq1™單位（72°C 下 30 分鐘內(nèi)摻入 60 nmole）。活化的鮭魚(yú)精z DNA 是模板；PC2（見(jiàn)下文）是緩沖區(qū)。注意，這些單位比標(biāo)準(zhǔn)單位大 6 倍。以標(biāo)準(zhǔn)單位（10 nmole/30 分鐘）計(jì)算，此處的酶濃度約為 30 單位/毫升。                   

盡管該酶在各種條件下都能很好地發(fā)揮作用，但推薦的反應(yīng)緩沖液 PC2 是：50 mM Tris-HCl pH 9.1、16 mM 硫酸銨、3.5 mM MgCl2 和 150 mg/ml BSA（隨訂單提供） . 請(qǐng)注意，與熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶的其他緩沖液相比，不含 KC1 和明膠。dNTP 濃度可以從每個(gè) 50 µM 到每個(gè) 1.2 mM，但通常使用 200 µM。如果 DNA 摻入超過(guò) 500 bp，您將需要比 Taq 蛋白更多的KlenTaq1™蛋白。如果使用與全長(zhǎng) Taq DNA 聚合酶相同的量（羅氏推薦），KlenTaq1™ 以 25-30 u/µl 的濃度運(yùn)輸，因此它可以輕松整合 2000 bp。
                   

 1 DNA 摻入單位 = 10 nmoles / 30 min='標(biāo)準(zhǔn)單位'。羅氏的酶每微升含有 5 個(gè)“標(biāo)準(zhǔn)單位"。KlenTaq1™每微升含有 25-30 個(gè)“標(biāo)準(zhǔn)單位"。               

      羅氏建議每 100 微升反應(yīng)使用 0.5 微升；也就是說(shuō)，1 微升將催化 2 個(gè)反應(yīng)。進(jìn)行反應(yīng)所需的KlenTaq1™量取決于摻入的長(zhǎng)度。對(duì)于KlenTaq1™ ，在 100 微升反應(yīng)中，1 微升將催化 15-20 次 500 bp 反應(yīng)和 8-10 次 1 kb 反應(yīng)和 3-5 次 2kb 模板 DNA 反應(yīng)。由于過(guò)量的 KlenTaq1™ 是無(wú)害的，我們保守地建議每次反應(yīng)使用 0.50 微升，以確保最大 2.5 kb 的所有物質(zhì)都有效。這就是我們檢查和滴定酶的方法。

參考巴恩斯，WM，基因，卷。112，第 29-35 頁(yè)，1992 年。巴恩斯，WM，PNAS，卷。19，第 2216-2220 頁(yè)，1994 年 3 月。Baskaran, N. 等，基因組研究，卷。6，第 633-638 頁(yè)，1996 年。
NB 對(duì)于KlenTaq1不含甘油（目錄號(hào)1001 NGKT）：儲(chǔ)存酶，并于4℃下的緩沖液中。  對(duì)于50% 甘油中的KlenTaq1 （目錄號(hào) 1001）：將酶儲(chǔ)存在 -200°C，將緩沖液儲(chǔ)存在 40°C。